實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>此次實(shí)驗(yàn)樣品為人全血DNA；需要對(duì)生物DNA生物樣本需要打斷到150-300bp進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序建庫(kù)實(shí)驗(yàn)，為得到這一片段長(zhǎng)度下的樣本，需進(jìn)行梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)。

　　實(shí)驗(yàn)設(shè)備：高通量聲波基因組剪切儀 JXDNA-500PICO

　　樣品前處理實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：

　　1.在實(shí)驗(yàn)開始前，需要先提前準(zhǔn)確好實(shí)驗(yàn)超聲波剪切設(shè)備以及實(shí)驗(yàn)所需應(yīng)用的耗材和若干的實(shí)驗(yàn)樣品

　　2.將適配器放入水槽中，再打開冷水機(jī)對(duì)其進(jìn)行預(yù)冷直至4度

　　3.對(duì)生物樣本進(jìn)行稀釋，將其稀釋到同一濃度

　　4.把稀釋好的同一濃度的DNA樣本按照體積梯度將其投入樣品離心管內(nèi)，標(biāo)好編號(hào)，震蕩離心

　　5.把帶有樣品的離心管放入儀器的適配器內(nèi)，但要注意水平配平，盡量將樣品放置在適配器外圈

　　6.啟動(dòng)儀器，調(diào)節(jié)程序運(yùn)行參數(shù)，設(shè)置好能量，工作時(shí)間，間隙時(shí)間，循環(huán)工作，總時(shí)長(zhǎng)梯度為17min，20min，25min

　　7.待儀器程序運(yùn)轉(zhuǎn)結(jié)束后，即可取出樣本，進(jìn)行電泳檢測(cè)

　　實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：

　　1.同等條件下人體DNA樣本的打斷難度大于小鼠大于植物，而不同的實(shí)驗(yàn)樣品需單獨(dú)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，不可混用實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　2.注意樣品離心管內(nèi)的樣本體積，需確保儀器內(nèi)水位要蓋住樣品

　　3.離心管需要配平，適配器壓蓋禁止傾斜，避免樣本開蓋污染

　　4.冷水機(jī)需要提前打開預(yù)冷，水流循環(huán)要調(diào)整穩(wěn)定不能過(guò)于激烈

　　樣品前處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

　　綜上結(jié)果可見(jiàn)，樣品投入量能影響檢測(cè)熒光強(qiáng)度，超聲打斷時(shí)間能影響片段長(zhǎng)度。綜合下機(jī)樣品的片段長(zhǎng)度和熒光強(qiáng)度，以及片段集中性，選擇20μL打斷25min作為實(shí)驗(yàn)條件。

　　在高通量測(cè)序樣本制備過(guò)程中，DNA片段化處理是一個(gè)核心步驟。因此隨機(jī)、準(zhǔn)確、集中無(wú)偏差的DNA片段化是保證DNA文庫(kù)質(zhì)量和均一性的關(guān)鍵一步。高通量聲波基因組剪切儀采用等溫、非接觸的方式對(duì)樣品進(jìn)行打斷、勻漿和混合，為DNA片段化又提供了新的研究手段，進(jìn)一步推動(dòng)了分子生物學(xué)的研究發(fā)展。